एक बार जिन कोशिकाओं में हम संवर्धन करते हैं

सेल फैक्ट्रीदूषित होते हैं, उनमें से अधिकांश को संभालना कठिन होता है।यदि दूषित कोशिकाएँ मूल्यवान हैं और उन्हें दोबारा प्राप्त करना कठिन है, तो उन्हें हटाने के लिए निम्नलिखित विधियों का उपयोग किया जा सकता है।

1. एंटीबायोटिक दवाओं का प्रयोग करें

एंटीबायोटिक्स बैक्टीरिया को मारने में अधिक प्रभावी होते हैंसेल कारखाने.अकेले दवा की तुलना में संयोजन दवा अधिक प्रभावी होती है।संदूषण के बाद निवारक दवा दवा की तुलना में अधिक प्रभावी होती है।निवारक दवा में आम तौर पर डबल एंटीबायोटिक (पेनिसिलिन 100u/mL प्लस स्ट्रेप्टोमाइसिन 100μg/mL) का उपयोग किया जाता है।संदूषण के बाद, सफाई विधि सामान्य मात्रा से 5 से 10 गुना अधिक होनी चाहिए।दवा जोड़ने के बाद 24 से 48 घंटों तक इस्तेमाल किया जाना चाहिए और फिर सामान्य दिनचर्या से बदल दिया जाना चाहिए।संस्कृति तरल.यह विधि संदूषण के प्रारंभिक चरण में प्रभावी हो सकती है।पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन के अलावा, उपयोग किए जाने वाले एंटीबायोटिक्स में जेंटामाइसिन, केनामाइसिन, पॉलीमीक्सिन, टेट्रासाइक्लिन, निस्टैटिन आदि भी शामिल हो सकते हैं। आमतौर पर 400 से 800 μg/mL केनामाइसिन या 200 μg/mL टेट्रासाइक्लिन का उपयोग किया जाता है।माध्यम को हर 2 से 3 दिन में बदला जाता है और उपचार के लिए 1 से 2 पीढ़ियों तक दिया जाता है।हाल के वर्षों में, यह बताया गया है कि 4-फ्लोरो, 2-हाइड्रॉक्सीक्विनोलिन (सिप्रोफ्लोक्सासिन, सिप), प्लू-रोमुटिलिन डेरिवेटिव (प्लू-रोमुटिलिन डेरिवेटिव, बीएम-साइक्लिन2: बीएम-1 और टेट्रासाइक्लिन डेरिवेटिव (बीएम-2)) एंटीबायोटिक्स हैं। अकेले या संयोजन में उपयोग करने पर माइकोप्लाज्मा को मारने में प्रभावी होता है।इन तीन एंटीबायोटिक्स को पीबीएस में 250X केंद्रित समाधानों में तैयार किया जाता है और बाद में उपयोग के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाता है।उपयोग सांद्रता Cip 10 μg/mL है, BM-1 10 μg/mL है, और BM-2 5μg/mL है।उपयोग करते समय, पहले दूषित कल्चर माध्यम को एस्पिरेट करें, BM-1 युक्त RPMI1640 कल्चर माध्यम को एस्पिरेट करें, फिर 3 दिनों के बाद कल्चर माध्यम को एस्पिरेट करें, BM-2 युक्त RPMI1640 कल्चर माध्यम को एस्पिरेट करें, और 4 दिनों के लिए कल्चर जोड़ें, और इसी तरह लगातार 3 दिनों तक .राउंड, जब तक यह 33258 फ्लोरोसेंट स्टेनिंग माइक्रोस्कोपी द्वारा साबित नहीं हो जाता कि माइकोप्लाज्मा समाप्त हो गया है, तब संस्कृति और मार्ग के लिए सामान्य संस्कृति माध्यम को 3-4 बार जोड़ा जाता है।

2. ताप उपचार

दूषित टिशू कल्चर को 41°C पर 18 घंटे तक इनक्यूबेट करने से माइकोप्लाज्मा नष्ट हो सकता है, लेकिन कोशिकाओं पर इसका प्रतिकूल प्रभाव पड़ता है।इसलिए, हीटिंग समय का पता लगाने के लिए उपचार से पहले एक प्रारंभिक परीक्षण किया जाना चाहिए जो माइकोप्लाज्मा को अधिकतम सीमा तक मार सकता है और कोशिकाओं पर सबसे कम प्रभाव डाल सकता है।यह विधि कभी-कभी अविश्वसनीय होती है।यदि पहले दवाओं से इलाज किया जाए और फिर 41 डिग्री सेल्सियस पर गर्म किया जाए, तो प्रभाव बेहतर होगा।

3. माइकोप्लाज्मा-विशिष्ट सीरम का प्रयोग करें

माइकोप्लाज्मा संदूषण को 5% खरगोश माइकोप्लाज्मा प्रतिरक्षा सीरम (हेमग्लूटीनेशन टिटर 1:320 या ऊपर) के साथ हटाया जा सकता है।क्योंकि विशिष्ट एंटीबॉडी माइकोप्लाज्मा के विकास को रोक सकती है, यह एंटीसेरम उपचार के 11 दिन बाद नकारात्मक हो जाता है और 5 महीने बाद भी नकारात्मक रहता है।नकारात्मक है.हालाँकि, यह विधि अधिक परेशानी वाली है और एंटीबायोटिक दवाओं के उपयोग जितनी सुविधाजनक और किफायती नहीं है।

4. अन्य विधियाँ

संदूषण को दूर करने के उपर्युक्त तरीकों के अलावा, जानवरों में टीकाकरण और नसबंदी के तरीके, मैक्रोफेज फागोसाइटोसिस तरीके, दूषित पदार्थों में ब्रोमोरासिल जोड़ने के तरीके भी हैं।संस्कृति की बोतलेंऔर फिर उन्हें प्रकाश से विकिरणित करना, और निस्पंदन विधियाँ, आदि, लेकिन वे सभी अधिक कष्टकारी और अप्रभावी हैं।इसलिए, एक बार जब माइकोप्लाज्मा संदूषण होता है, जब तक कि यह विशेष रूप से महत्वपूर्ण मूल्य का न हो, इसे आम तौर पर त्याग दिया जाता है और पुन: संवर्धित किया जाता है।

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